阻抑消減雜交

中文名稱

阻抑消減雜交

英文名稱

suppressive subtraction hybridization;SSH

定　　義

將阻抑性聚合酶鏈反應(yīng)與消減雜交相結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法，能有效地?cái)U(kuò)增低豐度的差異基因表達(dá)序列。一般是將目標(biāo)互補(bǔ)DNA(cDNA)5′端分別加上兩種人工接頭，用過量的驅(qū)動(dòng)DNA進(jìn)行兩次雜交，得到兩個(gè)5′端有不同接頭、不與驅(qū)動(dòng)DNA雜交的目標(biāo)cDNA，然后用與兩種人工接頭互補(bǔ)的引物PCR擴(kuò)增得目標(biāo)細(xì)胞差異表達(dá)的cDNA序列。

應(yīng)用學(xué)科

生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科），方法與技術(shù)（二級(jí)學(xué)科）

《閘閥彎管液流系統(tǒng)振動(dòng)噪聲及阻抑》是化學(xué)工業(yè)出版社出版圖書。

閘閥彎管液流系統(tǒng)振動(dòng)噪聲及阻抑

• 出版社： 化學(xué)工業(yè)出版社

• ISBN：9787122386274

• 版次：1

• 商品編碼：12865093

• 品牌：化學(xué)工業(yè)出版社

• 包裝：平裝

• 開本：16開

• 出版時(shí)間：2021-07-01

• 用紙：膠版紙

• 頁數(shù)：159

• 正文語種：中文

內(nèi)容簡介

本書采用理論分析、實(shí)驗(yàn)研究和數(shù)值模擬相結(jié)合的方法，對(duì)閘閥關(guān)閉過程中閘閥彎管液流系統(tǒng)的流固耦合行為進(jìn)行模擬分析，掌握了壁面湍流邊界層引發(fā)的壓力脈動(dòng)、振動(dòng)及噪聲分布情況，提出了有效抑制帶閥門彎管液流管路系統(tǒng)振動(dòng)及噪聲的結(jié)構(gòu)優(yōu)化方案，并采用聚酰亞胺樹脂基礦物質(zhì)復(fù)合材料設(shè)計(jì)新型高阻尼減振復(fù)合支承座，為抑制液流系統(tǒng)振動(dòng)及噪聲的產(chǎn)生和傳播，解決閘板卡澀、磨損等問題提供指導(dǎo)及解決方案。

本書可作為高等院校、企業(yè)中從事充液管路系統(tǒng)減振降噪理論和技術(shù)研究的科研人員及相關(guān)專業(yè)師生的參考用書。 2100433B

SSH 即抑制消減雜交技術(shù)是由Diatchenko 等于1996 年以m RNA 差別顯示技術(shù)為基礎(chǔ)建立起來的篩選未知差異表達(dá)基因的新技術(shù)。它主要基于最近出現(xiàn)的抑制PCR , 并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)化(normalization 或equalization ) 和消減雜交( substractive hybridization)。抑制PCR 通過利用含引物序列的雙鏈接頭(adaptor) 充當(dāng)引物模板, 使兩端接上同一接頭的非目的雙鏈片段具有反向末端重復(fù)序列, PCR 中不能擴(kuò)增, 從而達(dá)到抑制非目的片段而選擇性擴(kuò)增目的片段的目的。標(biāo)準(zhǔn)化步驟平衡了目的基因群中cDNA 的豐度, 即低豐度差異表達(dá)的基因不會(huì)丟失, 而高豐度差異表達(dá)的基因又不會(huì)被過量分離。消減雜交則扣除了目的基因群( tester) 與驅(qū)趕基因群(driver) 間的同源序列。

存在于tester 中而不存在于driver 中, 或在tester 中較在driver 中有高水平表達(dá)。

①第一次差減雜交,用過量的drivercDNA分別與tester2adaptor1cDNA和tester2adaptor2cD2NA雜交。分別形成SSH技術(shù)原理圖所示的tester單鏈片段a、tester雙鏈片段b、tester2driver同源雙鏈片段c和driver單、雙鏈片段d。根據(jù)雜交二級(jí)動(dòng)力學(xué),豐度較高的分子產(chǎn)生同源雜交體(homo2hy2brid)的速度較快,使高豐度與低豐度單鏈片段a濃度大致相等,從而實(shí)現(xiàn)tester單鏈片段a的標(biāo)準(zhǔn)化[6],并使連接一種接頭的差異表達(dá)基因a初步富集。②第二次差減雜交,將上述分別與drivercDNA雜交后的tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA混合,再加入新制備的變性drivercDNA,因tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA同源,除形成a、b、c、d片段外,又形成了新的連接有兩種接頭的雙鏈雜交片段e,即連接兩種接頭的差異表達(dá)序列e,是進(jìn)行PCR指數(shù)擴(kuò)增的模板。

PCR之前填補(bǔ)分子粘性末端以利于退火。第一輪PCR,加入針對(duì)adaptor1和adaptor2外側(cè)序列的特異引物進(jìn)行擴(kuò)增。結(jié)果:a、d片段因沒有引物結(jié)合位點(diǎn),不能進(jìn)行PCR擴(kuò)增;b片段由于兩端均為同一接頭,具有反向末端重復(fù)序列(invertedre2peats),在單鏈內(nèi)部形成互補(bǔ)發(fā)卡結(jié)構(gòu)的可能性及穩(wěn)定性均大于引物與其配對(duì)結(jié)合的可能性及穩(wěn)定性,故在PCR反應(yīng)中不能擴(kuò)增;c片段的一端為一種接頭而另一端無接頭,只能線形擴(kuò)增;只有e片段末端有兩種不同接頭,可通過PCR作指數(shù)擴(kuò)增。第二次PCR,加入一對(duì)與接頭內(nèi)側(cè)序列相同的巢式PCR特異引物,進(jìn)一步富集差異表達(dá)序列并降低背景。經(jīng)過兩輪PCR,基于PCR抑制效應(yīng)的存在,以及選用了兩對(duì)引物,可以特異擴(kuò)增代表了差異表達(dá)的cDNA片段。

經(jīng)上述PCR所得的差別表達(dá)基因片段可以利用接頭上存在的酶切位點(diǎn),插入適當(dāng)載體,轉(zhuǎn)化細(xì)菌。經(jīng)X-Gal藍(lán)白菌落初步篩選,獲得具有差異表達(dá)cDNA片段的陽性克隆。然后通過Northern雜交鑒定,cDNA序列分析,可獲得一些新的ESTs序列,如進(jìn)一步對(duì)該ESTs進(jìn)行深入的結(jié)構(gòu)和功能研究,可望獲得新的具有重要生物學(xué)作用的全長功能基因。

抑制消減雜交(suppression subtractive hybridization,SSH) 是建立在抑制PCR 與消運(yùn)用雜交二級(jí)動(dòng)力學(xué)原理，減雜交技術(shù)相結(jié)合的基礎(chǔ)上的更簡單快速的分離差異基因的方法。即豐度高的單鏈DNA 在退火時(shí)產(chǎn)生同源雜交的速度快于豐度低的單鏈DNA，使原來在豐度上有差別的單鏈DNA 相對(duì)含量達(dá)到基本一致，利用鏈內(nèi)退火優(yōu)于鏈間退火的特點(diǎn)，使非目的序列片段兩端反向重復(fù)序列在退火時(shí)產(chǎn)生類似發(fā)卡的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)，無法作為模板與引物配對(duì)從而選擇性地抑制了非目的基因片段的擴(kuò)增。

中文名稱

抑制消減雜交

英文名稱

suppression subtractive hybridization;SSH

定　　義

將抑制PCR與消減雜交技術(shù)相結(jié)合的一種快速分離差異表達(dá)基因的方法。

應(yīng)用學(xué)科

遺傳學(xué)（一級(jí)學(xué)科），基因組學(xué)（二級(jí)學(xué)科）