mRNA差異顯示技術實驗流程
組織樣品總RNA的提取→去除RNA樣品中的微量DNA→設計引物序列→逆轉(zhuǎn)錄歸類反應體系的建立→PCR選擇性擴增→mRNA DD-PCR產(chǎn)物的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳→差異表達條帶的回收→回收條帶的再次擴增→二次擴增產(chǎn)物的克隆、測序和GenBank查詢→Northern Blot和 Dot Blot雜交。
mRNA差異顯示技術原理
差異基因表達是細胞分化的基礎。正是這些基因在細胞中的特異表達與否,決定了生命歷程中細胞的發(fā)育和分化、細胞周期的調(diào)節(jié)、細胞衰老和死亡等。mRNA DD-PCR技術正是對組織特異性表達基因進 行分離的一種快速而行之有效的方法。不同的組織/細胞或遺傳背景相同的同一組織/細胞經(jīng)過不同的處理后,提取各自的總RNA,進行mRNA的逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA。進行逆轉(zhuǎn)錄時3'端引物采用oligo(dT)l2MN,其中M為A、C、G中的任何一種,N為A、C、G或T中的任何一種,所以共有12種oligo(dT)l2MN引物。其申M稱為錨定引物,起增大引物Tm值的作用。N稱為分類堿基,對逆轉(zhuǎn)錄進行歸類。
用這12種引物分別對同一總RNA樣品進行cDNA合成,即進行12次不同的逆轉(zhuǎn)錄反應,從而使逆轉(zhuǎn)錄的cDNA具有12種類型,也就是對cDNA進行12種歸類(目前較為流行的是進行4種歸類,即3'端引物采用oligo(dT)12M, M為A、C、G中的任何一種)。5'端引物采用20條由10個堿基組成的隨機引物。對每一類cDNA進行隨機引物和逆轉(zhuǎn)錄引物PCR擴增,通過對不同的組織/細胞或經(jīng)不同處理的同一組織 /細胞的同一類cDNA的PCR選擇性擴增產(chǎn)物的凝膠電泳分析,從而反映出不同樣品的基因在時間和空間上的組織特異性表達。簡述其基本原理,就是將基因背景相同的2個或幾個細胞系或組織mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,用不同引物對,進行PCR擴增,擴增時加入同位素標記的核苷酸。用測序膠電泳分離PCR產(chǎn)物,經(jīng)放射自顯影即可找到被擴增的差異表達的基因。
通常情況下,在某一細胞中或某一個關鍵的發(fā)育時間點上有15000種以上的基因在表達。如此眾多種類的mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)PCR選擇性擴增后其類型依然眾多,很難用電泳系統(tǒng)加以快速準確地分離。因而需要對逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的cDNA進行歸類處理,減輕不同PCR產(chǎn)物電泳分離的難度,提高分離的準確率。該方法就具有快速、靈敏和重復性好等優(yōu)點。
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她如果選用的是不計算損耗的 是沒有影響的 鋼筋是全國通用的
主要是生產(chǎn)工藝成熟,國內(nèi)的機器都是購買的國外的二手機器,另外技術培訓也不夠到位,造成生產(chǎn)的電熱膜質(zhì)量不達標,碳墨不均勻,又沒有研發(fā)跟進,比如內(nèi)部的粘合膠的耐高溫不達標,造成起鼓,外層材料更是有問題,又...
mRNA DD-PCR技術是篩選和克隆差異表達基因的一種快速而行之有效的方法。
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利用差異顯示法(DDRT-PCR)研究杉木的2個自然變異類型(句容0號及獨干杉)木材形成過程中基因表達差異。通過銀染后切割回收54個差異條帶,經(jīng)2次擴增和純化、克隆轉(zhuǎn)化及反向Northern雜交驗證后共獲得29個陽性克隆。測序后進行比對分析,結果表明:1)Blastn比對(分值>60)有9個cDNA克隆在GeneBank中找到了相似的功能,分別與核糖體蛋白基因、信號傳導功能、泛素蛋白基因、抗性功能、組氨酸磷酸轉(zhuǎn)移蛋白、細胞發(fā)生功能及能量代謝相關;2)Blastx比對有12個序列可進行功能推測;3)還有8個cDNA在數(shù)據(jù)庫中未發(fā)現(xiàn)匹配信息。這些信息可為杉木木材形成相關基因的分離和克隆提供研究基礎。
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成本標準差異分析管理流程圖 MP02.13.04.01 成本標準差異分析 成本標準 差異分 析管理 流程圖 成本標準 差異分 析管理 流程圖 開始 01 現(xiàn)場調(diào)研內(nèi)部 勞務成本實際情況 02 對比分析內(nèi)部勞務 成本實際情況和 內(nèi)部勞務成本價格 03 審核 通過 不通過 通過 不通過 04 審批 內(nèi)部勞務成本價格 差異分析報告 吐哈油田 財務資產(chǎn)處 吐哈油田 財務資產(chǎn)處 主管領導 會計核算中心 生產(chǎn)成本科 成本核算崗位 會計核算中心 生產(chǎn)成本科 成本核算崗位 會計核算中心 生產(chǎn)成本科 科長 成本標準 差異分 析管理 流程圖 成本標準 差異分 析管理 流程圖 05 調(diào)整內(nèi)部勞務 成本價格 MP02.13.04.02 成本標準調(diào)整 會計核算中心 生產(chǎn)成本科 成本核算崗位 3.流程步驟 編號 業(yè)務活動 操作崗位 /部門 業(yè)務表單 描述 MP02.13.04.02 成本標準調(diào)整 01 現(xiàn)場調(diào)研內(nèi)部
近年來顯示技術發(fā)展很快,平板顯示器以其完全不同的顯示和制造技術使之同傳統(tǒng)的視頻圖像顯示器有很大的差別。傳統(tǒng)的視頻圖像顯示器主要為陰極射線管CRT(Cathode ray tubes);而平板顯示器與之的主要區(qū)別在于重量和體積(厚度) 方面的變化,通常平板顯示器的厚度不超過10cm (4in) ,當然還有其他的不同,如顯示原理、制造材料、工藝以及視頻圖像顯示驅(qū)動方面的各項技術等。
平板顯示器具有完全平面化、輕、薄、省電等特點,符合未來圖像顯示器發(fā)展的必然趨勢。目前主要的平板顯示器包括: PDP (Plasma display panel)、LCD( Liquid crystal displays) 、FED( Field emission displays)、 OLED ( Organic light-emittingdiode displays )以及投影顯示技術(CRT、LCD、LCOS、DLP)等。
EPD是一種電泳顯示技術。
特點
又稱電泳顯示器,是類紙式顯示器較早發(fā)展的顯示技術,是利用有顏色的帶電球,藉由外加電場,在液態(tài)環(huán)境中移動,呈現(xiàn)不同顏色的顯示效果,其代表廠商包括E-Ink與Sipix。日本Bridgestone所推出的高速響應液態(tài)顯示器(QR-LPD),其工作原理與EPD相似,只是其成像的物質(zhì)不是使用帶電球,而是由黑白2色的粉末在電場之間移動產(chǎn)生顯示效果。另外發(fā)展較早的膽固醇液晶(ChLC),是一種結構相似于膽固醇分子的液晶。膽固醇反射式顯示器在不加電壓時,可存在兩種穩(wěn)定的狀態(tài),利用兩個狀態(tài)之間的轉(zhuǎn)換,呈現(xiàn)亮暗態(tài)的顯示效果。其它還有強誘電性液晶(Ferroelectric Liquid Crystal;FLC)等。
發(fā)展前景
電泳顯示(Electrophoretic,E-Paper)技術由于結合了普通紙張和電子顯示器的優(yōu)點,是最有可能實現(xiàn)電子紙張產(chǎn)業(yè)化的技術。它已從眾多顯示技術中脫穎而出,成為極具發(fā)展?jié)摿Φ娜嵝噪娮语@示技術之一。據(jù)iSuppli預測,電泳顯示全球市場2006年僅僅900萬美元,但是預計到2013年將增加到2.47億美元,年均增長率高達60.5%。該增長的大部分市場在指示標和新穎的直接驅(qū)動顯示器,另外電子顯示卡、柔性電子閱讀器、電子紙張和數(shù)字簽字等產(chǎn)品也將獲得應用。
電泳技術及其優(yōu)勢
何為電泳技術?照字面意味著“在一定的電壓下可泳動”,其顯示的工作原理是靠浸在透明或彩色液體之中的電離子移動,即通過翻轉(zhuǎn)或流動的微粒子來使像素變亮或變暗,并可以被制作在玻璃、金屬或塑料襯底上。具體技術是將直徑約為1mm的二氧化鈦粒子被散布在碳氫油中,黑色染料、表面活性劑以及使粒子帶電的電荷控制劑也被加到碳氫油中;這種混合物被放置在兩塊間距為10—100mm的平行導電板之間,當對兩塊導電板加電壓時,這些粒子會以電泳的方式從所在的薄板遷移到帶有相反電荷的薄板上。當粒子位于顯示器的正面(顯示面)時,顯示屏為白色,這是因為光通過二氧化鈦粒子散射回閱讀者一方;當粒子位于顯示器背面時,顯示器為黑色,這是因為彩色染料吸收了入射光。如果將背面的電極分成多個微小的圖像元素(像素),通過對顯示器的每個區(qū)域加上適當?shù)碾妷簛懋a(chǎn)生反射區(qū)和吸收區(qū)圖案,即可形成圖像。
電泳技術具有幾大優(yōu)勢。一是能耗低。由于具有雙穩(wěn)定性,在電源被關閉之后,仍然在顯示器上將圖像保留幾天或幾個月。二是電泳技術生產(chǎn)的顯示器屬于反射型,因此具有良好的日光可讀性,同樣也可以跟前面或側面的光線結合在一起,用于黑暗環(huán)境。三是具有低生產(chǎn)成本的潛力,因為該技術不需要嚴格的封裝,并且采用溶液處理技術如印刷是可行的。四是電泳顯示器以形狀因子靈活為特色,容許它們被制造在塑料、金屬或玻璃表面上,所以它是柔性顯示技術的最佳選擇。
電泳技術研發(fā)與生產(chǎn)企業(yè)
投入電泳技術開發(fā)的企業(yè)有美國E—Ink和SiPix公司、英國Plastic Logic、荷蘭飛利浦旗下Polymer Vision、日本Bridgestone、Hitachi、Seiko Epson、南韓三星電子與樂金飛利浦(LPL)等廠商。
E-Ink公司在產(chǎn)品開發(fā)方面走在最前面。2004年E-Ink公司與索尼公司和飛利浦公司聯(lián)合于推出電泳顯示電子書,在歐洲與德國的Vossloh公司聯(lián)合推出了電子紙信息顯示屏,與韓國的Neolux公司聯(lián)合推出了電子紙式廣告屏。SiPix公司和日本的Bridgestone公司聯(lián)合展示了一些電泳顯示屏樣屏,但還沒有產(chǎn)品推出。
2007年E—Ink與Seiko合作推出了可彎曲的手表外,E—Ink與Sony、大陸金科、臺灣eREAD等公司合作推出了電子書;諾基亞發(fā)布了概念手機Nokia888;香港o.d.m.公司推出柔性手表、數(shù)字卷標等產(chǎn)品;三星電子與LPL則在電泳顯示介質(zhì)上加裝彩色濾光片,形成彩色化,不過也因為增加了彩色濾光片,讓其推出的產(chǎn)品因反射率降低而看來亮度有些暗淡。荷蘭Polymer Vision積極投入電子紙與全彩柔性顯示器產(chǎn)品的技術開發(fā),已在英國設立生產(chǎn)廠,預計在2007年底可開始正式量產(chǎn),屆時并將推出全球首款折迭式電子書。
各公司在電泳技術方面略有差異。E—Ink采用的是微結構(Micro Structure)屬于微膠囊(Microcapsules),每個顯示元素的大小不均且排列零散,因采用黑白雙粒子,光反射率較佳是其優(yōu)點,可達到約35%~40%左右,閱讀時的感覺更貼近真正的紙張,缺點則是不夠堅固強韌,無法承受重壓。而SiPix公司采用的微結構則是專利的微杯數(shù)組(Microcup—Array),顯示元素大小一致并以數(shù)組方式排列整齊,具有較佳的機械與電氣特性,承受重壓也不會損壞,缺點則是光反射率稍差,約可達到28%。由于在技術上采用的微結構不同,連帶也影響到制程的選擇。有關專家指出:SiPix的微杯數(shù)組結構最大好處,在于可以使用連續(xù)滾動條式(Roll to Roll;R2R)的制程可實現(xiàn)大批量產(chǎn),生產(chǎn)成本較低;反觀E—Ink的微膠囊結構由于不夠堅固,因此無法實行以壓印方式生產(chǎn)的R2R制程,只能以較高的成本噴墨方式制造生產(chǎn)。
面臨的技術難題
一是響應速度比較慢。因為電泳技術依賴于粒子的運動,用于顯示的開關時間非常長,長達幾百毫秒,這個速度對視頻應用是不夠的。用于電泳顯示的使開關時間達到幾十毫秒的更快的材料正在開發(fā)之中。
二是顯示的雙穩(wěn)態(tài)、以及轉(zhuǎn)換速度慢,也影響了其連續(xù)顯示色彩的性能。一些電泳顯示器在兩種色彩之間切換,如果彩色顯示還需要一個彩色濾光片。該技術的驅(qū)動器正因雙穩(wěn)定性問題而面臨挑戰(zhàn),雙穩(wěn)定性對顯示有利,但它也給帶來了挑戰(zhàn),因為它需要采用一種獨立的驅(qū)動器架構,從而導致顯示器的成本上升。
三是制造工藝復雜,對材料要求高,成本較高。
我國電泳顯示技術發(fā)展現(xiàn)狀
我國電泳顯示研究起步晚,但進步很快,在材料研究及其應用基礎研究方面有基礎,并已有企業(yè)在積極開拓相關產(chǎn)品的研發(fā)。例如中山大學和廣州奧示科技有限公司合作,研制出黑白、紅綠藍彩色三原色電子墨水,并研制出了柔性顯示屏,制作出了彩色三原色的顯示屏。國內(nèi)與國外的技術差距主要在顯示屏、材料和功能產(chǎn)品方面。我國企業(yè)從發(fā)展自主知識產(chǎn)權的平板顯示屏制作技術和產(chǎn)品出發(fā),利用自主開發(fā)的微膠囊電泳顯示材料和超薄平板顯示器件結構,開展電子墨水超薄平板顯示器件產(chǎn)業(yè)化關鍵技術攻關,研制出了類紙式信息顯示屏,實現(xiàn)電泳平板顯示器件產(chǎn)品化。我國臺灣工研院也已鎖定 柔性顯示為未來幾年的發(fā)展重點,并且正與SiPix進行相關技術合作。
瞄準未來市場,研究未來產(chǎn)業(yè)發(fā)展,開發(fā)新技術,超前謀劃,是當前我國顯示產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的重中之重的工作。2100433B
MVA(Multi-domain Vertical Alignment)面板是利用突出物使液晶靜止時并非傳統(tǒng)的直立式,而是偏向某一個角度靜止。
多疇垂直配向
MVA(Multi-domain Vertical Alignment)面板是利用突出物使液晶靜止時并非傳統(tǒng)的直立式,而是偏向某一個角度靜止;當施加電壓讓液晶分子改變成水平以讓背光通過則更為快速,這樣便可以大幅度縮短顯示時間,也因為突出物改變液晶20ms以內(nèi)。分子配向,讓視野角度更為寬廣。在視角的增加上可達160度以上,反應時間短。
MVA面板技術是日本富士通轉(zhuǎn)讓給臺灣奇美和友達兩家公司的。金融危機發(fā)生后,廣角面板生產(chǎn)企業(yè)都遇到了危機,臺灣奇美友達感覺MVA面板生產(chǎn)成本高,顯示器利潤低,所以停止給顯示器廠家供貨。而韓國三星和LG則非常有市場頭腦,推出了低成本版的C-PVA和E-IPS,用價格和TN差別不大的低成本廣角面板一舉占領了過去MVA的市場。臺灣人把市場拱手相讓,只能夠怪他們自己了。唯一讓消費者不爽就是市場上買不到新MVA面板顯示器了。