熒光檢測(cè)器

從電子躍遷的角度來講，熒光是指某些物質(zhì)吸收了與它本身特征頻率相同的光線以后，原子中的某些電子從基態(tài)中的最低振動(dòng)能級(jí)躍遷到較高的某些振動(dòng)能級(jí)。電子在同類分子或其他分子中撞擊，消耗了相當(dāng)?shù)哪芰浚瑥亩陆档降谝浑娮蛹ぐl(fā)態(tài)中的最低振動(dòng)能級(jí)，能量的這種轉(zhuǎn)移形式稱為無輻射躍遷。由最低振動(dòng)能級(jí)下降到基態(tài)中的某些不同能級(jí)，同時(shí)發(fā)出比原來吸收的頻率低、波長(zhǎng)長(zhǎng)的一種光，就是熒光。被化合物吸收的光稱為激發(fā)光，產(chǎn)生的熒光稱為發(fā)射光。熒光的波長(zhǎng)總要長(zhǎng)于分子吸收的紫外光波長(zhǎng)，通常在可見光范圍內(nèi)。熒光的性質(zhì)與分子結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系，不同結(jié)構(gòu)的分子被激發(fā)后，并不是都能發(fā)射熒光。

在光致發(fā)光中，發(fā)射出的輻射總依賴于所吸收的輻射量。由于一個(gè)受激發(fā)的分子回到基態(tài)時(shí)可能以無輻射躍遷的形式產(chǎn)生能量損失，因而發(fā)射輻射的光子數(shù)通常都少于吸收輻射的光子數(shù)，它以量子效率Q來表示。

在固定的實(shí)驗(yàn)條件下，量子效率是個(gè)常數(shù)，通常Q小于1。對(duì)可用熒光檢測(cè)的物質(zhì)來說，Q值一般在0.1～0.9之間。熒光強(qiáng)度F與吸收光強(qiáng)度成正比。對(duì)于稀溶液，熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)溶液濃度、摩爾吸光系數(shù)、吸收池厚度、入射光強(qiáng)度、熒光的量子效率及熒光的收集效率等成正相關(guān)。在其他因素保持不變的條件下，物質(zhì)的熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測(cè)器的定量基礎(chǔ)。熒光檢測(cè)器屬于溶質(zhì)型檢測(cè)器，可直接用于定量分析。

選擇性高，只對(duì)熒光物質(zhì)有響應(yīng)；靈敏度也高，最低檢出限可達(dá)10-12ug/ml，適合于多環(huán)芳烴及各種熒光物質(zhì)的痕量分析。也可用于檢測(cè)不發(fā)熒光但經(jīng)化學(xué)反應(yīng)后可發(fā)熒光的物質(zhì)。如在酚類分析中，多數(shù)酚類不發(fā)熒光，為此先經(jīng)處理使其變?yōu)闊晒馕镔|(zhì)，而后進(jìn)行分析。

化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光，稱為熒光；

熒光強(qiáng)度 (F) 與激發(fā)光強(qiáng)度 (I0) 及熒光物質(zhì)濃度 (C) 之間的關(guān)系為：F=2.3QKI0εCl

F=KC

Q為量子產(chǎn)率，K為熒光效率，ε為摩爾吸光系數(shù)，l為光徑長(zhǎng)度。

熒光涉及光的吸收和發(fā)射兩個(gè)過程，因此任何熒光化合物，都有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜(excitation spectrum)和發(fā)射光譜(emission spectrum)。

熒光檢測(cè)器激發(fā)光譜

熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)以利于檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測(cè)辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長(zhǎng)的發(fā)射單色器，由光檢測(cè)元件檢測(cè)。最終得到熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的最大波長(zhǎng)處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目最多，即所吸收的光能量也最多，能產(chǎn)生最強(qiáng)的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí)，測(cè)定應(yīng)選擇最大激發(fā)波長(zhǎng) 。

熒光檢測(cè)器發(fā)射光譜

一般所說的熒光光譜，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長(zhǎng)固定時(shí)，發(fā)射單色器進(jìn)行波長(zhǎng)掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(zhǎng)(即發(fā)射波長(zhǎng)，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測(cè)定時(shí)選擇合適的測(cè)定波長(zhǎng)的依據(jù)。

另外，由于熒光測(cè)量?jī)x器的特性，使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測(cè)器的響應(yīng)等性能會(huì)隨波長(zhǎng)而變，所以同一化合物在不同的儀器上會(huì)得到不同的光譜圖，且彼此間無類比性，這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜，則需要對(duì)儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。

激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是熒光檢測(cè)的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì)檢測(cè)的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測(cè)靈敏度 。

熒光檢測(cè)器 紫外可見檢測(cè)器 二極管陣列檢測(cè)器 四元梯度泵 自動(dòng)進(jìn)樣器。

紫外－可見光檢測(cè)器：檢測(cè)限≤1×10-7g/ml，基線漂移≤5×10-3AU/h 熒光檢測(cè)器：檢測(cè)限≤1×10-9g/ml，基線漂移≤5×10-3FU/h。

光源：特種光源

小發(fā)單色器：濾光片，中心波長(zhǎng)487nm

熒光檢測(cè)器：中心波長(zhǎng)525nm

重復(fù)性：≤5%

測(cè)量值范圍（數(shù)顯值）：0-280

分辨率：0.1

分辨率：0.1

線性誤差：≤±10%

電源電壓變化：≤1%數(shù)顯值

電源：220V±10% 50Hz