4-氯-3-羥基丁酸乙酯

以提高3-羥基丙酸的產(chǎn)量為目標(biāo),對(duì)實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的基因工程大腸桿菌進(jìn)行改造,敲除形成副產(chǎn)物1,3-丙二醇的主要酶基因——乙醛脫氫酶基因yqh D,得到E.coli W3110Δyqh D(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),該工程菌搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量達(dá)到2.53 g/L,相比未敲除yqh D基因的菌株,產(chǎn)量提高了5.8倍。另外,敲除了甘油代謝途徑中的抑制因子glpR基因,得到E.coli W3110ΔglpR(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),該工程菌搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量達(dá)到2.86 g/L,相比未敲除glpR基因的菌株,產(chǎn)量提高了6.7倍。后經(jīng)5 L罐發(fā)酵培養(yǎng)后,3-羥基丙酸的產(chǎn)量提升到15.4 g/L。該實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步利用大腸桿菌工程菌發(fā)酵生產(chǎn)3-羥基丙酸提供了研究基礎(chǔ)。

研究了1-(2,6-二氯-4-三氟甲基苯基)-3-氰基-5-氨基吡唑的改進(jìn)合成工藝:經(jīng)2,6-二氯-4-三氟甲基苯胺重氮化反應(yīng),再與2,3-二氰基丙酸甲酯縮合,在氨氣作用下,甲苯溶液中20~25℃下反應(yīng)3 h,得到1-(2,6-二氯-4-三氟甲基苯基)-3-氰基-5-氨基吡唑.1-(2,6-二氯-4-三氟甲基苯基)-3-氰基-5-氨基吡唑是氟蟲(chóng)腈的重要中間體.產(chǎn)品及重要中間體結(jié)構(gòu)經(jīng)紅外光譜、核磁共振確認(rèn),并經(jīng)高效液相色譜測(cè)定產(chǎn)品純度為98%(HPLC),收率為89%,均高于文獻(xiàn)值.綜合考慮了影響反應(yīng)的因素:投料比、氨氣量、溶劑、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度.最佳反應(yīng)條件為:2,6-二氯-4-三氟甲基苯胺與2,3-二氰基丙酸甲酯的摩爾比為:1∶1.12,反應(yīng)溫度為3~5℃,反應(yīng)時(shí)間為5 h.產(chǎn)品為淡黃色針狀晶體,熔點(diǎn):141~142℃,工藝條件溫和、易操作、原料廉價(jià)易得、廢水量少,達(dá)到綠色清潔化生產(chǎn),因此有廣闊的工業(yè)化前景.